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当前位置:水产资料 → 论文解读--罗湖病毒可 今天是:2019年11月12日 星期二

论文解读--罗湖病毒可从亲鱼传播至其生殖器官和受精卵

出处:公众号水生动物健康评估 作者:小破同学 水产养殖网 2019-11-06 11:21:00

今天为大家带来一篇《罗湖病毒可从亲鱼传播至其生殖器官和受精卵》的文献解读,引用信息如下:
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小编前期就曾报道过罗非鱼湖病毒(TiLV)是一种新发现的罗非鱼病毒,目前在世界上有14个国家的养殖或野生罗非鱼种群中都有罗湖病毒感染的记录,TiLV爆发后可导致20-90%的死亡率。报道发现在一些罗非鱼孵化场,受精卵和罗非鱼的早期发育阶段中可以检测到罗湖病毒,表明该病毒可能垂直传播。然而,尚不清楚TiLV是否能够从受感染的亲鱼群传播到它们的生殖器官和后代。这篇文章研究旨在探讨实验感染的亲鱼能否将病毒传给其生殖器官、卵子、精子和受精卵。结果如下:

一、PCR检测罗湖病毒感染亲鱼和体外受精卵

本研究采用PCR方法检测了罗湖病毒感染3个罗非鱼家系后亲鱼的组织及其体外受精卵。雌性亲鱼取肝脏、血液、卵巢和未受精卵,雄性亲鱼取肝脏、血液和睾丸。分别于受精后3、12、64h采集人工受精卵。以同样的方式处理来自两个对照家系的相应样本。表1中总结的结果表明,在实验受到攻毒的鱼类中存在TiLV的全身感染。用PCR方法检测了来自受试家系的全部样本,包括雄性和雌性亲鱼的肝脏、血液、生殖器官和未受精卵都呈现TiLV阳性结果。三个感染家系在受精后3、12和64小时后采集的受精卵也呈阳性,但1家系在3和64小时采集的样本除外。来自两个对照家系(4-5)的样本TiLV均为阴性(表1)。
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二、原位杂交揭示TiLV在鱼类组织中的定位

采用原位杂交(ISH)技术,进一步研究TiLV在感染亲鱼肝脏、生殖器官和受精卵中的存在,并与未感染TiLV的鱼类家系进行对照。结果如下:
(1)肝脏: 使用TiLV特异性探针,发现从6只感染的亲鱼(3只雄性和3只雌性)采集的肝脏样本显示出强烈的ISH反应信号。图2显示了感染亲鱼ISH结果的代表性照片。与H&E染色切片相比,ISH强阳性信号定位于肝脏血管周围区域(箭头,图2c)。在高倍镜下,感染肝细胞的细胞核和细胞质中均可见阳性信号(图2f)。这些肝细胞也显示出退化的迹象,并在其细胞质中积聚脂褐素(棕色)(图2d),而合胞性肝炎的迹象则没有清楚的观察到。
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(2)卵巢: 通过H&E染色,观察到雌性卵巢中卵母细胞的不同发育阶段(图3)。感染卵巢的结缔组织中可见炎性淋巴细胞、含黑色素的巨噬细胞浸润(图3A、D)。ISH结果与PCR结果一致,发现感染雌性亲鱼的卵巢在卵母细胞不同发育阶段周围的结缔组织中显示出强烈的TiLV阳性信号(图3C,F)。退化卵母细胞也被称为闭锁卵母细胞似乎在其膜上和卵母细胞内具有更强的反应性(图3F)。卵母细胞膜的某些区域也发现TiLV阳性(箭头,图3C,F)。
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(3)睾丸
与卵巢相似,用TiLV特异性探针在受感染的雄性罗非鱼亲鱼中所有睾丸样本中检测出阳性信号。阳性信号主要出现在结缔组织和一些类似淋巴细胞的细胞中,特别是在血管周围的组织区域(箭头,图4C,E和G)。精母细胞、精子细胞和精子区均未检测到阳性信号。
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(4)受精卵
结果40-50%的受精卵细胞主要是卵子内检测到的TiLV阳性反应(图5)。
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三、细胞系培养揭示病毒活性

该研究还采用E11细胞系传代培养法,对本次实验中的TiLV的活力和感染状况进行了评价。从感染TiLV的亲鱼和对照组亲鱼中采集的血清、肝脏、卵巢、睾丸、受精卵和未受精卵并制备滤液。结果发现E11细胞系中TiLV感染的斑块形成和细胞收缩的典型细胞病变效应(CPE)在接种感染鱼的血清、肝脏、卵巢、睾丸和未受精卵的滤液后的地2-5天清晰可见。图6B清晰可见接种感染TiLV的亲鱼卵巢上清液后E11细胞中的CPE现象。
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四、总结

综上所述,本研究表明罗非鱼亲鱼体内感染了罗非鱼病毒后,病毒可以通过血液循环系统进入雌雄鱼的生殖器官并感染卵子、精子和受精卵。因此,为了繁育不含TiLV的种苗,我们应该避免使用感染TiLV的亲鱼进行育种。

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